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PCNA是细胞DNA多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。

1. 仪器：微量移液器、低速离心机、平板摇床、微量移液器、流式细胞仪、1.5mL Micro-tube
   
2. 试剂：
   
   1. Tween-20
      
   2. Triton X-100
      
   3. BSA
      
   4. 0.05%胰蛋白酶-EDTA细胞消化液
      
   5. 乙醇
3. 要求用户自备的溶液及其配置：
   
   1. PBS/1% BSA洗涤液：0.1mg BSA溶于10mL PBS，按实验用量配制所需要的体积量。
      
   2. 抗体孵育液0.5% Tween-20/1%BSA/PBS：0.05mL Tween-20,0.1mg BSA溶于9.95mL PBS
      
   3. PI染色母液(1mg/mL)
      
   4. RNase A

1. 所有的沉淀细胞步骤为、所有的沉淀细胞步骤为2000rpm,5min。
   
2. 可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为、可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106，样品可以4℃储存于乙醇中到2个星期。
   
3. 流式细胞检测时需要设立对照试验、流式细胞检测时需要设立对照试验：
   ① 只用PI染细胞
   ② 只用羊抗小鼠IgG-FITC染细胞
   ③ 未染色的细胞组

1. 在最适的环境下培养细胞。
   
2. 除去培养液，用PBS洗一次。
   
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，(注意1)保证每管细胞数在) 10⁶个。
   
4. 用0.3mL PBS轻轻的重悬细胞，然后慢慢加入0.7mL预冷的100%乙醇。用1mL玻璃移液管小心的混匀。在4℃至少1h。(注意2)
   
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
   
6. 用150μL PBS/1% BSA洗细胞2次。
   
7. 用100μL抗体孵育液(0.5% Tween-20/1%BSA/PBS)重悬细胞，加入1μL PCNA抗体(1μg/10⁶ cells)，室温孵育1小时。
   
8. 离心收集细胞，用150μL 1% BSA-PBS洗2次。
   
9. 离心收集细胞，用50μL抗体孵育液重悬，加1μL (1.5μg/10⁶ cells)羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30分钟。离心收集细胞，150μL PBS/1% BSA洗2次。
   
10. 用含有终浓度为10μg/mL RNase A和20μg/mL PI的0.5mL PBS(pH7.4)重悬细胞。
    
11. 避光使细胞在室温下孵育20min后，离心收集细胞，150μL PBS/1% BSA洗2次后，转移至流式检测管中重悬。
    
12. FACS检测或者储存于4℃。(注意3)